LIA Trabajos finales de grado

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Examinando LIA Trabajos finales de grado por Materia "contaminación de alimentos"

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    Desarrollo de un método molecular alternativo para la detección de Listeria monocytogenes. Aplicación en muestras de queso.
    (Universidad Nacional de Rafaela, 2025-12-01) Moreno, Nadia; Primo, María Evangelina
    Listeria monocytogenes es capaz de sobrevivir y crecer en condiciones de refrigeración. Los alimentos se pueden contaminar en cualquier eslabón de la cadena productiva. El método microbiológico (ISO 11290-1:2017) de referencia requiere 10 días para identificar la especie. El objetivo de este trabajo fue desarrollar y validar un método molecular para la detección de L. monocytogenes en muestras de quesos blandos. Se diseñó una reacción en cadena de la polimerasa (PCR) anidada para la amplificación de una secuencia del gen HlyA que codifica para la listeriolisina O, factor de patogenicidad. Un control interno de amplificación (CIA) fue diseñado para evaluar la presencia de inhibidores de la polimerasa y un control de ADN plasmídico, con un fragmento del gen HlyA, fue generado para determinar el límite de detección (LD), reproducibilidad y repetibilidad de la PCR anidada. La validación se realizó con muestras obtenidas a distintos tiempos de cultivos contaminados artificialmente con L. monocytogenes (0; 3,4; 34 y 340 ufc/25 g) por el método microbiológico de referencia. Finalmente, se analizaron 80 muestras de quesos blandos comerciales. La utilización de 100.000 copias por reacción del CIA no interfiere con la amplificación del ADN molde. El LD de la PCR anidada fue de 30 copias por reacción con 100% de repetibilidad y reproducibilidad. La muestra óptima para la realización de la PCR anidada fue la obtenida luego de 24 h de cultivo en Caldo Fraser. En estas condiciones, la concentración más baja ensayada (3,4 ufc/25 g) fue detectada en las 3 muestras analizadas. Todas las muestras de quesos comerciales fueron negativas para L. monocytogenes tanto por PCR anidada como por el método microbiológico convencional. Estos resultados demuestran que la PCR anidada desarrollada es una herramienta robusta, específica y altamente sensible para la detección de L. monocytogenes en alimentos, con potencial aplicación en controles de calidad microbiológica en la industria alimentaria.
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    Detección de Campylobacter spp. en milanesas de pollo elaboradas en comercios de la ciudad de Rafaela, año 2024
    (Universidad Nacional de Rafaela, 2024-12-26) Avedano, Marina Alejandra; Bernacchia, Andrea Mónica; Raffín, Rosalía
    Las bacterias Campylobacter están ampliamente distribuidas en la mayoría de los animales de sangre caliente, fundamentalmente en aves destinadas al consumo humano. Existen especies patógenas como Campylobacter jejuni, Campylobacter coli, etc. que se encuentran vinculadas a enfermedades transmitidas por los alimentos (ETAs) y al consumo de aguas contaminadas. En la industria avícola la producción primaria es controlada por el Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria (SENASA) donde el principal patógeno que se monitorea es Salmonella spp., una bacteria productora de ETAs, potencialmente peligrosa para los consumidores. Los comercios que adquieren esta materia prima para elaborar sus productos, como la milanesa de pollo, deben implementar buenas prácticas de elaboración para evitar la contaminación cruzada al producto final. El presente trabajo “Detección y enumeración de Campylobacter spp. en milanesas de pollo elaboradas en comercios de la ciudad de Rafaela, año 2024” pretendió demostrar que Campylobacter spp. es un contaminante frecuente en este tipo de alimentos. La metodología elegida para detectarlos fue la técnica ISO 10272-1:2017 “Método horizontal para la detección y la enumeración de Campylobacter spp.”. Constó de una etapa previa de verificación del método que resultó satisfactoria, llegando al eLOD50 deseado. De acuerdo a este resultado se comenzó con el análisis de las muestras de milanesas.
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    Obtención de bacteriocinas recombinantes con potencial actividad antimicrobiana frente a organismos productores de enfermedades transmitidas por alimentos
    (Universidad Nacional de Rafaela, 2025-12-16) Chiaraviglio, Micaela; Camussone, Cecilia; Rivarossa, Florencia
    Las enfermedades transmitidas por alimentos (ETAs) se encuentran ampliamente difundidas y generan problemas en la salud pública. Entre los agentes etiológicos de ETAs se encuentran bacterias, virus y parásitos. Una estrategia para prevenir alteraciones en los alimentos es el agregado de antimicrobianos de origen químico. El uso no controlado de estas sustancias puede ocasionar un riesgo para la salud de los consumidores. En consecuencia, los compuestos antibacterianos naturales han ganado importancia como preservantes en la industria alimenticia. Entre ellos, las bacteriocinas, que son péptidos antimicrobianos naturales producidos por bacterias ácido-lácticas, representan una alternativa prometedora a los conservantes químicos debido a su alta especificidad y baja toxicidad. El presente trabajo tuvo como objetivo obtener una molécula recombinante de la bacteriocina Enterocina A (EntA) mediante clonado y expresión heteróloga en Saccharomyces cerevisiae, y evaluar su actividad antimicrobiana frente a microorganismos productores de enfermedades transmitidas por alimentos (ETAs). Para ello, en este estudio se sintetizó la secuencia del gen de EntA con codones optimizados para su expresión en Saccharomyces cerevisiae y se clonó en el vector de secreción extracelular YEpFLAG-1 mediante recombinación homóloga. Además, se evaluó una construcción alternativa fusionada, EntA-TRX, disponible en el laboratorio. La expresión recombinante se analizó por SDS-PAGE y Western blot, detectándose la presencia de EntA-TRX, aunque no de EntA. Los ensayos de actividad antimicrobiana in vitro, realizados por métodos de difusión en agar y en estría frente a Staphylococcus aureus, Enterococcus faecalis y Listeria innocua, no mostraron inhibición del crecimiento bacteriano. No obstante, se logró estandarizar un sistema de expresión en Saccharomyces cerevisiae aplicable a futuras producciones de proteínas recombinantes seguras para uso alimentario.