Obtención de bacteriocinas recombinantes con potencial actividad antimicrobiana frente a organismos productores de enfermedades transmitidas por alimentos

Abstract

Las enfermedades transmitidas por alimentos (ETAs) se encuentran ampliamente difundidas y generan problemas en la salud pública. Entre los agentes etiológicos de ETAs se encuentran bacterias, virus y parásitos. Una estrategia para prevenir alteraciones en los alimentos es el agregado de antimicrobianos de origen químico. El uso no controlado de estas sustancias puede ocasionar un riesgo para la salud de los consumidores. En consecuencia, los compuestos antibacterianos naturales han ganado importancia como preservantes en la industria alimenticia. Entre ellos, las bacteriocinas, que son péptidos antimicrobianos naturales producidos por bacterias ácido-lácticas, representan una alternativa prometedora a los conservantes químicos debido a su alta especificidad y baja toxicidad. El presente trabajo tuvo como objetivo obtener una molécula recombinante de la bacteriocina Enterocina A (EntA) mediante clonado y expresión heteróloga en Saccharomyces cerevisiae, y evaluar su actividad antimicrobiana frente a microorganismos productores de enfermedades transmitidas por alimentos (ETAs). Para ello, en este estudio se sintetizó la secuencia del gen de EntA con codones optimizados para su expresión en Saccharomyces cerevisiae y se clonó en el vector de secreción extracelular YEpFLAG-1 mediante recombinación homóloga. Además, se evaluó una construcción alternativa fusionada, EntA-TRX, disponible en el laboratorio. La expresión recombinante se analizó por SDS-PAGE y Western blot, detectándose la presencia de EntA-TRX, aunque no de EntA. Los ensayos de actividad antimicrobiana in vitro, realizados por métodos de difusión en agar y en estría frente a Staphylococcus aureus, Enterococcus faecalis y Listeria innocua, no mostraron inhibición del crecimiento bacteriano. No obstante, se logró estandarizar un sistema de expresión en Saccharomyces cerevisiae aplicable a futuras producciones de proteínas recombinantes seguras para uso alimentario.