Examinando por Autor "Moreno, Nadia"

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Comparison of real‑time PCR and nested PCR based on the HlyA gene for the detection of Listeria monocytogenes. Application on cheese samples
(Sociedad Brasileña de Microbiología, 2024-04-30) Zbrun, María Virginia; Moreno, Nadia; Camussone, María Cecilia; Signorini, Marcelo Lisandro; Primo, María Evangelina
The aim of the present study was to compare the performance of a nested polymerase chain reaction (nPCR) and a real-time PCR based on the amplification of the HlyA gene from Listeria monocytogenes using a plasmid DNA standard. Nested PCR was developed with an internal amplification control (IAC). Both techniques were validated in soft cheese samples by comparing their results with the results of the microbiological reference method ISO 11290–1:2017. Cheese samples artificially contaminated with 3.5 to 3,500 UFC/25 g were processed by ISO 11290–1:2017 and, at several times of culture, DNA samples were extracted. All cheeses contaminated with L. monocytogenes were positive for the microbiological method 96 h post contamination and for nPCR and real-time PCR 48 h post contamination. At this time, the HlyA gene was amplified in all contaminated samples. Both molecular techniques showed the same sensitivity, 30 copies/reaction or 3.5 UFC/25 g, when plasmid DNA standard or artificially contaminated cheese samples were used. Finally, eighty soft cheese samples obtained from local retail stores and tested by three methods were negative, indicating a 100% concordance in results. The development of an nPCR with IAC reinforces the reliability of the negative results without increasing the costs of the reaction. Besides, nPCR showed less sensitivity to the presence of inhibitory substances in the reaction. The use of one of these molecular techniques could be easily coupled to the microbiological method, serving as a screening method in the food industry for hygiene monitoring and early identification of contaminated foods.
Desarrollo de un método molecular alternativo para la detección de Listeria monocytogenes. Aplicación en muestras de queso.
(Universidad Nacional de Rafaela, 2025-12-01) Moreno, Nadia; Primo, María Evangelina
Listeria monocytogenes es capaz de sobrevivir y crecer en condiciones de refrigeración. Los alimentos se pueden contaminar en cualquier eslabón de la cadena productiva. El método microbiológico (ISO 11290-1:2017) de referencia requiere 10 días para identificar la especie. El objetivo de este trabajo fue desarrollar y validar un método molecular para la detección de L. monocytogenes en muestras de quesos blandos. Se diseñó una reacción en cadena de la polimerasa (PCR) anidada para la amplificación de una secuencia del gen HlyA que codifica para la listeriolisina O, factor de patogenicidad. Un control interno de amplificación (CIA) fue diseñado para evaluar la presencia de inhibidores de la polimerasa y un control de ADN plasmídico, con un fragmento del gen HlyA, fue generado para determinar el límite de detección (LD), reproducibilidad y repetibilidad de la PCR anidada. La validación se realizó con muestras obtenidas a distintos tiempos de cultivos contaminados artificialmente con L. monocytogenes (0; 3,4; 34 y 340 ufc/25 g) por el método microbiológico de referencia. Finalmente, se analizaron 80 muestras de quesos blandos comerciales. La utilización de 100.000 copias por reacción del CIA no interfiere con la amplificación del ADN molde. El LD de la PCR anidada fue de 30 copias por reacción con 100% de repetibilidad y reproducibilidad. La muestra óptima para la realización de la PCR anidada fue la obtenida luego de 24 h de cultivo en Caldo Fraser. En estas condiciones, la concentración más baja ensayada (3,4 ufc/25 g) fue detectada en las 3 muestras analizadas. Todas las muestras de quesos comerciales fueron negativas para L. monocytogenes tanto por PCR anidada como por el método microbiológico convencional. Estos resultados demuestran que la PCR anidada desarrollada es una herramienta robusta, específica y altamente sensible para la detección de L. monocytogenes en alimentos, con potencial aplicación en controles de calidad microbiológica en la industria alimentaria.